你是否有這樣的疑問，新購入的培養(yǎng)基，如何進行技術(shù)性驗收來保證我們?nèi)粘z測的結(jié)果？
答案是：根據(jù)GB4789.28-2013《食品安全國家標準 食品微生物學(xué)檢驗 培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求》來對培養(yǎng)基和試劑進行驗收。該標準涉及到非常多的培養(yǎng)基和試劑類別，今天先給大家介紹一下固體培養(yǎng)基的性能測試方法。
固體培養(yǎng)基的性能測試方法主要有兩種：半定量和定量方法，其中，定量測試方法在GB4789.28新標準的征求意見稿中成為了主要測試方法，這次我們以平板計數(shù)瓊脂PCA為例，為大家介紹非選擇性固體培養(yǎng)基性能測試方法的操作及注意事項。
一、定量測試方法
1、操作步驟
1.1?根據(jù)培養(yǎng)基名稱查附錄D，獲得質(zhì)控菌株、質(zhì)控指標和評定標準的相關(guān)信息；
1.2 將質(zhì)控菌株接種到對應(yīng)的非選擇性肉湯中培養(yǎng)過夜；
1.3?將菌懸液濃度調(diào)整到每平板接種水平為20 CFU～200 CFU；
1.4 準備待測培養(yǎng)基平板，將菌液涂布于待測培養(yǎng)基上，同時涂布參比培養(yǎng)基①；（也可用傾注法或螺旋涂布法操作）
1.5 培養(yǎng)后，計算參比培養(yǎng)基、待測培養(yǎng)基上的菌落數(shù)，計算生長率②，再與附錄D評定標準進行對比判斷。
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注：①參比培養(yǎng)基：一般細菌采用TSA，霉菌和酵母采用沙氏葡萄糖瓊脂，對營養(yǎng)有特殊要求的微生物采用適合其生長的不含抑菌劑或抗生素的培養(yǎng)基。
②生長率PR：待測培養(yǎng)基平板上得到的菌落總數(shù)除以參比培養(yǎng)基平板上獲得的菌落總數(shù)得出的數(shù)值。
2、注意事項
在整個操作過程中，步驟1.3菌懸液濃度調(diào)整為難點，今天將分享一下菌懸液調(diào)整的方法：
2.1 培養(yǎng)后的新鮮菌液可先估計濃度，如：常見的大腸埃希氏菌和金黃色葡萄球菌培養(yǎng)后原始菌液濃度可達到1*10^8CFU/mL以上，枯草芽孢桿菌培養(yǎng)后可達到1*10^6CFU/mL以上；
2.2 再根據(jù)所需菌懸液進行梯度稀釋，稀釋時可以采用10倍梯度稀釋法。
新鮮菌液濃度估算方法：因每個實驗室的菌株活性和選擇的復(fù)活的培養(yǎng)基等不同，原始濃度會存在一些差異，建議先做菌濃度的預(yù)估實驗。如常見的大腸埃希氏菌ATCC25922接種到BHI過夜培養(yǎng)后菌液濃度約為10^8CFU/mL，對菌液進行梯度稀釋后，選擇10-6?、10-7兩個稀釋度進行計數(shù)，通過計算結(jié)果可得出新鮮菌液的濃度。以此數(shù)據(jù)作為該菌的原始濃度值。
二、半定量測試方法
1、操作步驟
1.1 查附錄E，獲得質(zhì)控菌株、質(zhì)控指標和評定標準的相關(guān)信息；
1.2 將質(zhì)控菌株接種到對應(yīng)的非選擇性肉湯中培養(yǎng)過夜；
1.3 用1μL接種環(huán)進行平板劃線（如下圖所示）
1.4 培養(yǎng)后，評價菌落的形狀、大小和生長密度，并計算生長指數(shù)G。
2、注意事項
使用1微升接種環(huán)（購買成品接種環(huán)），自己制作的接種環(huán)無法保證準確的接種量。
接種前菌液適度混勻，避免產(chǎn)生大量氣泡，影響接種量。
接種環(huán)浸入培養(yǎng)基液面下1cm左右，沾一滿環(huán)接種物，避免沾取表層氣泡。
接種環(huán)與瓊脂平板表面角度適宜，一般為20°-30°。
劃線時力度與速度適宜，前后均勻并且連續(xù)。
可制作16條線模板置于平板底部，便于操作。
每個菌種接種2個平板，取平均值。
測試片的質(zhì)控方法
在新發(fā)布的GB4789.2-2022《食品安全國家標準 食品微生物學(xué)檢驗 菌落總數(shù)測定》中，新增了測試片方法，在使用測試片時，應(yīng)如何對其進行技術(shù)驗收呢？
微生物測試片是一種特殊的培養(yǎng)基，它是以紙片、冷水可凝膠或無紡布等作為培養(yǎng)基的載體，用來檢測食品中的微生物，考慮到其形式的特殊性，建議采用定量測試方法。
如果想了解到更多其他培養(yǎng)基驗收方法，可關(guān)注“北京陸橋”公眾號。
