相信開展過維生素檢測的小伙伴們，已經(jīng)體驗到了微生物法檢測維生素的“難”了。試驗中總是出現(xiàn)諸多問題——活化菌株不成功，標(biāo)準(zhǔn)曲線異常，檢測結(jié)果回收率偏高或者偏低，重復(fù)性差等。為何此種方法如此難做，國標(biāo)還將葉酸、B12、生物素、泛酸的微生物檢測方法作為首選方法和仲裁方法呢?
微生物法根據(jù)菌株必須依賴特定維生素才能生長的原理，利用比濁法測定細(xì)菌繁殖程度或代謝產(chǎn)物，間接對該維生素進(jìn)行定量測定。該方法特異性強，靈敏度高，也是國際上廣泛使用的方法。微生物法檢測的是具有生物活性可以被吸收利用的維生素總量，這是儀器分析方法很難做到的。
“難”在哪里呢？是否有解決辦法呢？
“難”點一：菌株活化、保存、定期轉(zhuǎn)種以及接種液制備
鼠李糖乳桿菌ATCC7469、植物乳桿菌ATCC8014、萊士曼氏乳桿菌ATCC7830，這三株菌中當(dāng)屬萊士曼氏乳桿菌最為嬌貴，常有活化失敗的案例發(fā)生。建議大家購買此菌后，第一次活化時需嚴(yán)格按照ATCC說明書上方法先接種于MRS肉湯中35℃，有氧培養(yǎng)48h，之后轉(zhuǎn)種血平板于35℃，厭氧培養(yǎng)48h，方可活化成功。此外，每次做微生物法檢測維生素試驗前，需提前用一周時間來活化儲備菌種，連續(xù)傳種2代～3代恢復(fù)細(xì)菌活力后，方可使用。接種液的制備因項目不同而處理方法不同，筆者不再贅述，只強調(diào)一點：方法中只給出大致菌液濃度范圍即“透光率60%～80%之間”，具體調(diào)成多少濃度，還需實驗者根據(jù)菌株狀態(tài)和試驗經(jīng)驗進(jìn)行制備。
應(yīng)對“難”點一的解決方案——使用凍干的定量菌球
此產(chǎn)品真空包裝，菌濃度定量制備且符合國標(biāo)要求，直接加入培養(yǎng)基中即可使用，既可保證菌株活性又可免去活菌、洗菌、調(diào)菌濃度等繁瑣操作，方便、簡單、準(zhǔn)確！同時，我司還提供了標(biāo)準(zhǔn)菌株的來源說明，可存檔溯源。
“難”點二——標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制
目前標(biāo)準(zhǔn)中，要求標(biāo)準(zhǔn)品的純度需要≥99%。通常購買到的標(biāo)準(zhǔn)品純度都不夠，因此需要折算后進(jìn)行稱量，具體算法為：
稱量后按照國標(biāo)要求逐步稀釋，依次配制標(biāo)準(zhǔn)儲備液、中間液和工作液。配制時，需要注意——以下幾點：
標(biāo)準(zhǔn)品精確稱量，應(yīng)使用足夠精度的天平進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品的稱量；
不同維生素種類使用不同的溶解液，溶解需充分搖勻，每次定容都需十分精準(zhǔn)；
使用棕色容量瓶進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制，應(yīng)注意不同維生素種類的標(biāo)準(zhǔn)儲備液、中間液和工作液的保存條件及效期；
國標(biāo)規(guī)定配制使用的水為二級水，所用的試劑比如NaOH、乙醇等為分析純或者更高級別。
標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制過程復(fù)雜、步驟較多、對操作人員的技術(shù)水平要求比較高，配制的準(zhǔn)確與否會直接影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，導(dǎo)致回收率偏高或者偏低的情況發(fā)生。
應(yīng)對“難”點二的解決方案——使用凍干的定量標(biāo)準(zhǔn)品
我司推出凍干定量標(biāo)準(zhǔn)品，只需使用無菌水復(fù)溶，充分震蕩混勻，即可使用。一“鍵”操作即可免去大家進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品稱量、配制、稀釋、保存等復(fù)雜的工作。同時我司還提供了標(biāo)準(zhǔn)品來源說明，可溯源，請放心使用。
制備維生素測定培養(yǎng)基，三角瓶需專用，不可與配制其他培養(yǎng)基的三角瓶混用，否則易混入目標(biāo)維生素的成分；
培養(yǎng)基配制用水，必須使用GB/T6682規(guī)定的二級水；
維生素測定培養(yǎng)基中，含有很多不耐熱、易變性成分，高壓滅菌時需注意不可過度加熱。此外，滅菌后應(yīng)及時將測定系列管從高壓鍋中拿出，放入冷水中快速降溫；
操作繁瑣，耗時。需先將培養(yǎng)基分裝系列測試管，滅菌，再接種菌液，此操作過程繁瑣易污染，稍有不慎就會導(dǎo)致試驗失敗。
應(yīng)對“難”點三的解決方案——使用即用型培養(yǎng)基
即用型培養(yǎng)基，已滅菌處理，加入菌球混勻后，直接分裝到系列試驗管中，只需“一步”即可完成接種操作，替代國標(biāo)中培養(yǎng)基滅菌和接種菌液的“兩步”工作，解決上述“難”點的同時，大大節(jié)約時間，提高工作效率。
維生素檢測過程所涉及的所有器皿，包括容量瓶，吸管，三角瓶，試管，試管塞等均需處理，方可使用。此外，建議每個項目器皿專用，不要混用，避免干擾。
應(yīng)對“難”點四的解決方案——使用無菌試管
維生素即用型產(chǎn)品，配套使用無菌試管，避免試管，試管塞清洗，酸泡，熱處理的麻煩，極大程度的去除維生素檢測的干擾因素，提高工作效率的同時，保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。
維生素即用型產(chǎn)品——可有效解決國標(biāo)法檢測試驗過程中的所有“難”點！減少人員操作誤差，提升試驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，并可極大程度的提高檢測效率！
