乳制品是營養(yǎng)豐富、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的優(yōu)質(zhì)蛋白且極易遭受致病菌的污染，而沙門氏菌是乳品檢測最普遍的項(xiàng)目，且沙門氏菌不分解蛋白質(zhì)，被沙門氏菌污染的乳品常常不發(fā)生明顯腐敗，不易被發(fā)現(xiàn)，所以沙門氏菌的檢測不能止步于選擇性分離的步驟，應(yīng)共同參考生化試驗(yàn)和血清學(xué)鑒定的結(jié)果來確定是否檢出沙門氏菌。
首先了解一下沙門氏菌屬的生化反應(yīng)，如下圖【參考《沙門菌屬血清型診斷》朱超，許學(xué)斌編著】：
其中，傷寒沙門氏菌產(chǎn)酸不產(chǎn)氣；亞利桑那菌可分解乳糖；豬霍亂、多數(shù)甲型副傷寒、仙臺(tái)、馬流產(chǎn)、雞、貝塔及一些傷寒沙門菌血清型等不產(chǎn)硫化氫或僅產(chǎn)生少量硫化氫。
沙門氏菌屬的種類繁多，抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜，截止2007年1月WHOCC-Salm出版的WKLM表解第9版已包括2579個(gè)血清型。
沙門氏菌的生化和血清學(xué)鑒定試驗(yàn)的操作較繁瑣，也有較多的操作點(diǎn)需要注意，否則檢測結(jié)果容易出錯(cuò)，下面咱們一起來學(xué)習(xí)一下。
生化試驗(yàn)
1.三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)
根據(jù)GB4789.4-2016的表1中沙門氏菌屬的典型菌落特征描述，從選擇性瓊脂平板上分別挑取2個(gè)以上典型或可疑菌落（用接種針自菌落中心挑?。?，直接接種于三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基，同時(shí)用接種環(huán)挑取相同菌落劃線營養(yǎng)瓊脂平板進(jìn)行純化，36℃±1℃培養(yǎng)16h-24h，必要時(shí)可延長培養(yǎng)至48h。
1.1三糖鐵試驗(yàn)
注意??三糖鐵瓊脂接種時(shí)先在斜面劃線，再于底層穿刺，但高層穿刺時(shí)接種針不能穿到底部，接種太深，否則有些菌產(chǎn)生的硫化氫會(huì)布滿試管底部，影響底層培養(yǎng)基顏色變化的觀察。
建議接種后的三糖鐵瓊脂安瓿瓶用封口膜輕輕的覆蓋在瓶口，防止培養(yǎng)過程中培養(yǎng)基失水干縮后氧氣進(jìn)入，底部的黃色被氧化變色，影響結(jié)果觀察；再用接種針在封口膜上扎些小孔利于培養(yǎng)過程中氧氣的供應(yīng)。
1.2賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)
原理：某些細(xì)菌在酸性厭氧環(huán)境，且有賴氨酸底物存在的情況下能誘導(dǎo)產(chǎn)生賴氨酸脫羧酶，使賴氨酸脫羧產(chǎn)生堿性物質(zhì)尸胺，導(dǎo)致培養(yǎng)基變紫，但不產(chǎn)生賴氨酸脫羧酶的細(xì)菌只能代謝葡萄糖產(chǎn)酸培養(yǎng)基變黃。
注意??在進(jìn)行賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)時(shí)，注意要挑取同一個(gè)待檢菌落同時(shí)接種氨基酸脫羧酶對(duì)照管和賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)管各一支，接種后在對(duì)照管和試驗(yàn)管液面上方均需加無菌液體石蠟（一定要是無菌的）覆蓋。
您是否疑問為什么非要加無菌的液體石蠟？
由于氨基酸脫羧的產(chǎn)物尸胺、腐胺等遇氧不穩(wěn)定，所以需要加無菌液體石蠟覆蓋隔絕空氣，保持胺的穩(wěn)定性，確保試驗(yàn)結(jié)果的真實(shí)性。
鼠傷寒沙門氏菌
ATCC 14028
1.3生化結(jié)果初步判斷
根據(jù)三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)結(jié)果，參考GB4789.4-2016中表2來初步判斷是否有可疑的沙門氏菌。
根據(jù)表2的描述，如果遇到①三糖鐵瓊脂的試驗(yàn)管底部變紅；②整個(gè)三糖鐵瓊脂試管為黃色，并且賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)為陰性的試驗(yàn)結(jié)果時(shí)，說明該菌株為非沙門氏菌，不需再做后續(xù)的生化試驗(yàn)。